質(zhì)控菌株及其保存與應用

一.菌種保存
保存菌種用的培養(yǎng)基必須能維持使微生物長期生存且不出現(xiàn)生長或新陳代謝過于旺盛的情況，菌株能較長時間存活且保持性狀穩(wěn)定。
1.菌種保存的注意事項
（1）不能用含有可發(fā)酵性糖的培養(yǎng)基保存菌種。
（2）不可以使用選擇性培養(yǎng)基，不能從藥敏試驗平板培養(yǎng)基上留取菌株。
（3）不可使培養(yǎng)菌干枯，所有試管要保持良好的密封性。
（4）對溫度變化敏感的細菌，如淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌，不可貯存于冰箱，但可用快速冷凍干燥法長期保存。
（5）作為抗菌藥物敏感試驗用的標準菌株，由保存狀態(tài)取出后，不能連續(xù)使用1 周以上，應定期傳代，但一般不超過6 次，必要時進行更換。
2.菌種保存的方法
保存菌種的方法，應根據(jù)菌種的類型和保存目的進行選擇，一般包括以下幾種方法：
（1）培養(yǎng)基保存法：此法不需要特殊設備，并可隨時提供使用，為常用的一種保存方法，其缺點是易發(fā)生變異。營養(yǎng)要求不高的細菌，可用半固體保存法，一般2～3月轉(zhuǎn)種1次，并檢查菌株特性，如特性已改變，則需丟棄。特殊培養(yǎng)要求的細菌，如流感嗜血桿菌可接種巧克力瓊脂斜面，密封后冰箱貯存，每2周轉(zhuǎn)種1次。淋病奈瑟菌保存于巧克力瓊脂，每天或隔天轉(zhuǎn)種1 次，不宜4 ℃冰箱保存，因易死亡。
（2）快速冷凍法：將純培養(yǎng)細菌在液體培養(yǎng)基上增菌后，取數(shù)個新鮮菌落加入含小牛血清或脫纖維綿羊血的培養(yǎng)基內(nèi)制成濃菌懸液，再放人無菌玻璃珠，將此瓶放入－30℃以下低溫冰箱保存。需要時用無菌鑷子取出1 粒玻璃珠置增菌培養(yǎng)液中，增菌培養(yǎng)后即可獲得新鮮菌種。用此方法，大部分細菌可保存6 ～12 月，甚至更長時間。
（3）冷凍干燥法：是菌種保存*方法，可以免去細菌因頻繁傳代而造成菌種污染、變異和死亡。此法需冷凍干燥設備，操作較費時，但適用于需要長期保存的菌種。
三.菌種管理
（1）實驗室保存菌種需按規(guī)定時間轉(zhuǎn)種，每轉(zhuǎn)種3代作一次鑒定，并有詳細記錄卡，包括菌種名稱、編號、來源、保存日期、傳代情況等。
（2）實驗室保存菌株不得擅自處理或帶出實驗室，如確需要帶離實驗室，須經(jīng)上級領(lǐng)導批準，并做好詳細的記錄。
（3）菌種應有專人保管，如遇工作調(diào)動，應及時做好交接工作。

二.菌種類型
（一）標準茵株
要搞好臨床微生物學檢驗質(zhì)控，必須保存有一批標準菌株，作為對儀器、培養(yǎng)基、染色液、試劑和診斷血清的質(zhì)控菌株，也可作為從事細菌檢驗的工作人員熟悉某些菌株的教具。
1.標準菌株的條件

（1）形態(tài)、生理、生化及血清學特性典型，并相當穩(wěn)定。
（2）菌株對所試藥物產(chǎn)生恒定的抑菌環(huán)和恰當?shù)腗IC 值。
（3）對測試項目反應敏感。如測試巧克力瓊脂平板的分離能力，應選流感嗜血桿菌或腦膜炎奈瑟菌。
2.標準菌株的來源
（1）ATCC：美國典型菌種保藏中心。
（2）NCTC：英國國家典型菌種保藏中心。
（3）（中國）國家菌種保藏中心。
（4）實驗室分離菌株：實驗室分離菌株必須經(jīng)過嚴格鑒定，其形態(tài)、生理、生化特征典型，經(jīng)多次傳代，特征恒定，否則不能作為標準菌株。
（二）臨床菌株
臨床分離的菌株，可保存幾天、幾星期或根據(jù)需要選擇一些菌株長期保存，以便進行統(tǒng)計、分析，或用于教學和研究。